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免疫(共)沉淀——命中注定我爱你!

添加时间: 2019-01-04 作者: 爱必信 浏览次数: 542
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爱必信absin免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒(货号:abs955),现两件6折100T仅需3000元!截止2019年1月11日。

免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白质相互作用的经典方法,其基于抗体和蛋白的特异性亲和作用,通过捕获与蛋白或抗原特异性结合的抗体,进而从复杂的样品中捕获及富集目标蛋白,同时可以测定与之相互作用的蛋白或其它生物大分子。
免疫沉淀(IP)则主要是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。
(互作蛋白A和B,与对应抗体结合后,再与偶联beads的Protein A/G结合)
 
 
免疫(共)沉淀(IP/CoIP)主要实验流程见上图:
(1)转染表达目的蛋白的质粒后,后续主要是转染表达目的蛋白的质粒(2)对样本的裂解处理,(3)蛋白和抗体、珠子的孵育,(4)免疫复合物沉淀洗涤之后,(5)再进行后续分析,常规是做WB,也有用质谱分析的。

可以看出,CoIP本身的实验流程并不复杂,只是为了拿到靠谱又漂亮的结果、需要我们不断优化实验条件,包括裂解液的选择、抗体的选择、Protein A与G的选择和使用量、beads的选择等。

小编收集了以下常见的免疫(共)沉淀需注意点:
1.   细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP40 或Triton X-100)。每种细胞的裂解
      条件是不同的,需要通过经验和试验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2%SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂。
2.  免疫(共)沉淀最需要注意点就是抗体的性质。抗体不同、其和抗原的结合能力也不同,WB、IHC能结合未必能用在IP反应。建议仔细检查抗体的
     说明书。特别是多抗的特异性是问题。

3.  需充分考虑抗体/缓冲液的比例。抗体过少则不能检出抗原,过多则不能沉降在beads上,残存在上清。缓冲剂太少则不能溶解抗原,过多则抗原
     被稀释。
4.  如果拿到免疫复合物后用WB检验,必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,若预测不正确,实验就得不到结果,实验本身具有
     冒险性。
 
那么做CoIP,我们需要拿到怎样的实验验证结果、从而有效证明我们的猜测呢?
Figure from INMAP Overexpression Inhibits Cell Proliferation, Induces Genomic Instability and Functions through p53/p21 Pathways , Zhu Y et al.PLoS One. 2015 Jan 30;10(1)

上图是CoIP验证实验的典型结果图片。INMAP是一个在有丝分裂中起重要作用的蛋白,保证了纺锤体和端粒的完整性,作者通过CoIP验证研究了INMAP通过P53/P21途径起作用。



文章的C和D图中,研究者分别使用Flag单抗和p21抗体,拉下目的蛋白及其互作蛋白后,通过Input的阳性、control组normal lgG的阴性和最终WB分析互作蛋白的阳性,充分验证、结论令人信服!

所以,命中注定的爱情、果然还是需要经过层层考验验证呐!

爱必信作为一个致力于为中国科研事业服务的中国品牌,我们开发的明星爆款产品免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒采用蛋白特异结合能力超强的ProteinA、ProteinG为捕获载体,目的蛋白捕获能力高,试验结果重复性和一致性均得到有效验证。

abs955 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒组分如下:
试剂组分 包装规格
Lysis buffer 30ml*1
10*Wash buffer 50ml*1
1*SDS 样品缓冲液 1ml*1
Protein A 琼脂糖珠 250μl*1
Protein G 琼脂糖珠 250μl*1
我们的产品优势:
1. 采用优质Protein A、Protein G作为捕获载体,更加节省抗体;
3. 主要辅助试剂均包含在内,一站式解决IP/CoIP实验烦恼;
5. 高性价比,足够实验50次!
  2. 试剂盒内组分及操作流程经实验优化,确保更高的检测灵敏度;
4. 实验结果重复性好;

目前爱必信免疫共沉淀试剂盒团购促销中2件6折,截止2019年1月11日不要错过哦。
   货号    产品名称    规格    原价    促销价    货期
   abs955    免疫(共)沉淀(IP/CoIP)试剂盒    50tests×2    2500×2    1500×2    现货

 

爱必信特色产品线(全部现货):
二抗、标签抗体、对照抗体;WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;细胞因子、信号通路调节剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒、呼吸爆发试剂盒;动植物提取物,定制服务(抗体/多肽/蛋白)...

 

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