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流式胞内染色—刺激剂与蛋白转运抑制剂的选择

添加时间: 2019-01-09 作者: 爱必信 浏览次数: 347
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流式实验应用中,除了常见的表面抗原染色,还会进行胞内因子检测,比如:常见的细胞因子:IFN、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF;核内转录因子:FOXP3、GATA3、STAT5;胞内信号通路相关蛋白:MAPK家族 (AKT、P38、JNK、ERK) 等。胞内染色步骤相对复杂,涉及的变异因素多,很容易出现结果不稳定、较难重复等问题。absin® 给大家推荐流式胞内染色过程中常使用到的刺激剂和蛋白转运抑制剂。

一般情况下,静息状态的T、B细胞不产生或极低产生细胞因子,多数细胞因子必须在T细胞激活后才能分泌产生,所以必须采用体外激活来刺激细胞因子的表达。流式胞内染色中最常用的活化方法就是使用一定浓度的广泛性刺激剂:PMA (佛波酯) 和lonomycin (离子霉素),刺激细胞4-6 h (可优化)。

PMA和lonomycin刺激细胞活化的机制:在细胞内,Protein kinase C(PKC) 的激活,可以引起下游众多蛋白激酶的磷酸化,形成级联反应,导致多种蛋白的表达引起细胞的活化。PKC可以在DAG (二酯酰甘油) 和Calcium (Ca2+) 的共同作用下被激活,PMA是一种DAG的模拟物,lonomycin 是Ca2+的转运剂,可将细胞器内的Ca2+ 转运到胞浆,所以PMA和lonomycin的共同作用可以激活PKC,从而引起一系列的下游反应。

产品推荐:
   货号    产品名称    规格    货期
   abs9107    PMA    1mg, 5mg    现货
   abs9108    Ionomycin    1mg, 5mg    现货

刺激后的细胞不能直接进行流式检测,细胞因子会分泌到胞外影响实验结果,还需要加入阻断剂,将细胞因子阻断在胞内,有助于细胞因子的聚集使胞内染色信号增强,提高检出率,所以这一步至关重要。常用的阻断剂有两种:1. Monensin (莫能霉素);2. Brefeldin A (BFA,布雷非德菌素a)

Monensin是一种离子载体(ionophore),可选择性结合单价阳离子如:Li+、Na+、K+、Rb+、Ag+和Tl+,并把这些阳离子转运到细胞膜内,破坏跨膜离子梯度;BFA是一种真菌代谢物,可以干扰囊泡自粗面内质网至高尔基体的转运。这两种阻断剂的区别:Monensin的阻断作用在高尔基体转运到胞外,BFA的阻断作用在内质网转运到高尔基体。
产品推荐:
   货号    产品名称    规格    货期
   abs812975    Monensin sodium salt    25mg/50mg/100mg    1-2周
   abs812975    Monensin sodium salt    1ml*10mM (Ethanol) 新增~    1-2周
   abs810012    Brefeldin A    25mg/50mg/100mg    现货
   abs810012    Brefeldin A    1ml*10mM (DMSO) 新增~    1周

不同细胞因子的阻断方式 (参考):
   种属    细胞因子    蛋白转运抑制剂
   Human    IL-1α, IL-6, IL-8, TNF-α    Monensin
   Human    IFN-g, IL-2, IL-10, IL-12, MCP-1, MCP-3,
   MIG, MIP-1α, RANTES
   Monensin 或 BFA
   Mouse    IL-6, IL-12, TNF-α    BFA
   Mouse    GM-CSF, IL-3, IL-4, IL-5, IL-10    Monensin
   Mouse    IFN-g, IL-2    Monensin 或 BFA

爱必信 (absin®) 努力做您身边的科研百宝箱,我们的产品在不断地丰富和完善,
每周都有新品上架,本周新品试剂尝鲜:
   货号    产品名称    规格
   abs20035    Rabbit IgG    10mg
   abs20036    Rat IgG    1mg
   abs20037    Human IgG    1mg
   abs20038    Mouse IgG    1mg
   abs47001863    IsoMaltose    20mg
   abs47047807    1,5-二磷酸-D-核酮糖(RuDP)    5mg,25mg
   abs47047808    Rifampicin    100mg
   abs50005    PI细胞周期与凋亡试剂盒    50T,100T
   abs50006    Annexin V-EGFP/PI Apoptosis analysis kit    20T,50T
   abs50007    Annexin V-PE/7-AAD apoptosis analysis kit    25T,100T
   abs50008    Annexin V-APC/7-AAD apoptosis analysis kit    25T,100T
   abs50009    Annexin V-APC/PI apoptosis analysis kit    25T,100T
   abs9242    显影液    20L*2
   abs9243    定影液    20L*2
   abs9244    青霉素-链霉素溶液(100×双抗)    100ml
   abs9245    青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗)    100ml
   abs9246    青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗)    100ml
   abs9247    EDTA抗原修复液(50×)    100ml
   abs9248    柠檬酸钠抗原修复液(50×)    100ml
   abs9249    柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)    100ml
   abs9250    SSC缓冲液,20×    100ml
   abs9251    MOPS缓冲液,10×    100ml,500ml
   abs9252    支原体染色检测试剂盒    100T

 

爱必信特色产品线(全部现货):
二抗、标签抗体、对照抗体;WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;细胞因子、信号通路调节剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒、呼吸爆发试剂盒;动植物提取物,定制服务(抗体/多肽/蛋白)...

 

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